共聚焦显微镜的自发荧光
当组织进行图像采集时，自发荧光可能是背底增加的一个主要原因。自然情况下，多种细胞可产生自发荧光。在酵母菌细胞和植物细胞，可看到红色的绿叶素荧光。另外，某些试剂，尤其是戊二醛固定剂可能是自发荧光的来源，但经氢硼化物处理后，其自发荧光可降低或消除。使用超出自发荧光激发光波长范围的激发光可消除自发荧光，为避免短波长自发荧光的干扰，常选用Cy5的长波长进行激发。通过使用不同波长的激光激发未染色的标本，可评估标本自发荧光的量，注意设定光电倍增管的增益和背底水平以及激光的功率。自发荧光可通过高强度激光快闪作用进行光漂白，将标本完全暴露于水银灯的光照中也有同样的效果。更复杂的处理自发荧光的方法是进行时间分辨荧光成像。自发荧光也可通过图像提取技术加以减除，尽管自发荧光在进行图像采集时常常会带来问题，但在进行多标记显示时，也可利用组织的自发荧光来显示完整的细胞形态。
上一页：光学显微镜图像延时成像 下一页：偏光显微镜视域直径的测定
